1.项目所属科学技术领域 属于农业生物技术领域。 2.主要技术内容 1）猪断奶后多系统衰竭综合征（ PMWS） 断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS )是由猪圆环病毒2型(PCV2) 引起的一种重要疾病,严重发病地区死淘率高达40%以上。由于PCV2 严重破坏猪的免疫系统,使各种疫苗免疫失败。因此, PCV2 感染的早期诊断和病猪的淘汰成为PMWS 防治的重点。 2） PMWS防控新策略和支撑技术的建立 有鉴于此，申请人提出了 PMWS防控新策略： （1）首先养殖户用PCV2 LAMP试剂盒定性检测猪群，将被PCV2感染的猪与健康猪隔离开来，防止交叉感染。 （2）用定量PCR试剂盒对被PCV2感染的猪进行定量检测,文献报道猪体内PCV2病毒超过4000拷贝/mL血液就会患病，而患病猪很难康复，因此，建议将PCV2病毒超过4000拷贝/mL血液的猪直接淘汰。 （3）母猪会将PCV2传播给仔猪，公猪会将PCV2传播给母猪，因此养殖户用PCV2 LAMP试剂盒定性检测种猪，将被PCV2感染的种猪直接淘汰。因此，通过以上两种方法组合起来进行检测、隔离和对病猪的适当淘汰可以防控PMWS，最大限度减少养殖户经济损失。 为此我们建立了PCV2 LAMP现场可视化定性和荧光定量PCR快速检测支撑技术并成功开发出试剂盒。将两种试剂盒组合起来防控PMWS，最大限度减少养殖户经济损失。 3.成果科技创新程度 （1）PCV2 LAMP现场可视化快速定性检测试剂盒: a.设计的PCV2 LAMP引物序列未见报道； b.增加了一对环引物，可使LAMP反应时间减少一半，这是前人工作所没有的； c.在LAMP反应体系中添加了甜菜碱，加速了解链速度，这是前人工作所没有的； d.首创了不提取PCV2病毒核酸、直接以猪血清样品为模板加入反应体系进行LAMP反应，减少了操作时间和步骤，降低成本。 （2）PCV2荧光定量PCR定量检测试剂盒: a.设计的荧光定量PCR引物和探针序列未见报道； b.创造和优化了PCV2荧光定量PCR反应体系和参数，效果大大优于前人的报道； （3）首次提出了将基于LAMP现场可视化快速定性检测方法和荧光定量PCR定量检测方法组合起来进行猪PCV2定性、定量检测以防控PMWS的检测策略和技术。 （4）检测灵敏度达到进出口畜产品检测国际标准。无论在技术水平、还是试剂盒的灵敏度上，均高于国内外同类研究。 4. 知识产权及应用推广情况 在国内外杂志发表论文12篇，其中SCI论文3篇，他引112次；获授权专利4项。提出PMWS防控新策略一种。开发试剂盒2种。 在江、浙、沪、皖、鲁、豫养猪场将这一新策略和技术进行了示范推广，用于PMWS防控。近三年来，完成单位累计应用本项目成果检测1.7亿头猪，新增销售额4.96亿元、利润0.78亿元。由于利用此技术减少了药物和饲料及人工成本。累积节约10.5亿元养殖投入。采用此技术全国每年将节约180亿元的养殖成本。