项目属于兽医学领域—新型疫苗及疫苗佐剂研制。 大肠杆菌热敏性肠毒素（Heat-labile toxin，LT）是高效粘膜佐剂，基因改造的无毒mLT粘膜佐剂蛋白与畜禽疫苗配伍，研制可经粘膜免疫的新型疫苗，提升免疫的针对性和免疫效力，为疫苗精准免疫提供支撑，同时确保动物福利及养殖业健康发展。 创新内容： 1.采用点突变技术，改造E.coli肠毒素LT蛋白毒性关键氨基酸位点，获得6个重组mLT蛋白。国内外首次报道了双位点突变蛋白mLT23；利用Patent mouse试验证实6个mLT蛋白毒性、ADP-核糖转移酶活性均低于野生LT蛋白； 完成了6个mLT蛋白的佐剂活性分析，证实mLT佐剂蛋白配伍疫苗能提高免疫小鼠、雏鸡粘膜IgA抗体、血清IgG抗体及HI抗体滴度；且滴鼻和口服途径免疫均可诱导理想的局部和全身抗体水平，证实了mLT蛋白对粘膜局部的免疫增强作用；建立和优化了重组mLT蛋白300L罐发酵工艺，筛选确定了mLT蛋白、配伍疫苗冻干保护剂配方； 2．完成了mLT蛋白申报新兽药证书的中间试验、生物安全评价试验，申报并获得首例mLT蛋白生物安全证书； 3. 研制了含有mLT佐剂蛋白的鸡用配伍疫苗制剂1例，并进行雏鸡滴鼻免疫试验，鼻粘膜局部IgA抗体水平显著高于对照组（P<0.05），证实含有mLT 佐剂蛋白的NDV配伍疫苗能有效提升呼吸道粘膜抗体水平，对阻断病毒感染起到良好屏障作用。完成2000余头份鸡用配伍疫苗的免疫推广应用。4. 研制含mLT佐剂蛋白猪瘟病毒配伍疫苗1例，配伍疫苗能增强口服免疫动物局部粘膜抗体、血清抗体水平，显著好于常规注射免疫；同时能刺激细胞因子产生。完成了5万余头猪疫苗临床免疫。 关键创新点： 1．根据LT蛋白空间构象及关键氨基酸位点功能，采用定点突变技术，设计减毒/无毒LT蛋白，替代传统的甲醛脱毒技术，减毒效果确实、易于产业化；2．双位点突变体mLT23，为国内首次研究报道；mLT13突变体为国内外首次研究报道；具有自主知识产权； 3．配伍研制了含mLT佐剂猪瘟病毒疫苗1例、鸡NDV疫苗制剂1例，局部粘膜免疫效果优于传统注射免疫，改变疫苗传统注射方式，既能达到理想的免疫效果，又能减少动物应激，保障动物福利，具有推广应用价值。 专利、论文以及推广应用： 1 获授权发明专利1项（ZL 2008 1 0036032.1）； 申请专利（实质审查）2项（ (申请号:201510 342782.1；201401331148.3）； 2获农业生物安全证书1件 (农基安证字（2012）第002号)；3发表论文12篇（被引用9次）；硕士研究生论文5篇；4 签署技术开发合同20万元（附件14-16;） 经济社会效益和对科技进步的作用等： 直接经济效益20万；研制的配伍疫苗制剂已完成5万余头猪免疫推广应用，产品效益200余万元，畜禽场增加经济效益达1亿元以上。佐剂蛋白可用于养殖场畜禽配伍疫苗直接使用；也可用于疫苗生产时配伍使用。该技术可辐射和推广其它疫苗研制和生产，促进畜禽精准免疫技术发展和应用。